Силекс
Реактивы и наборы для молекулярной биологии

Тематический каталог

Набор Амплификация ДНК без контаминации

Наборы

Ферменты для мол. биологии

Дезокситрифосфаты

Праймеры и маркеры

Рестриктазы

Буфера и растворы

Реактивы для мол. биологии

Магнитные технологии

Автоматизация и роботы

Скачать каталог

Вернуться в раздел "Алфавитный каталог"
Название набора Кат. № Состав набора Цена, рубл. Кол-во   Заказать
Амплификация ДНК без контаминации K0141 Taq полимераза
Урацил ДНК гликозилаза
Реакционный буфер ( х 10 )
Смесь dNTP с dUTP ( 2.5mM dC,dG,dA, 7.5mM dU )
Стерильная вода
Краска для нанесения
Минеральное масло		 2500
    
Описание Набор рассчитан на 200 процедур амплификации (объем реакционной смеси - 25 мкл) или 100 процедур амплификации (объем реакционной смеси - 50 мкл).
Набор предназначен для амплификации ДНК методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Такие достоинства полимеразной цепной реакции (ПЦР) как возможность многократно размножить практически единичную последовательность могут обернуться большими проблемами, когда продукт амплификации, полученный в ходе одного эксперимента, из-за неаккуратного обращения выступает матрицей в другом эксперименте. Как следствие такой неаккуратности получается ложноположительный результат. При регулярном проведении ПЦР с одними и теми же праймерами, при невозможности разделить помещения подготовки реактивов и проведения проведения анализа продуктов амплификации, при использовании одного комплекта пипеток для всех стадий постановки и анализа результатов ПЦР, вероятность получения ложноположительных результатов значительно возрастает. Решить проблему ложноположительных результатов, вызванных случайным внесением следов продукта, наработанных в ходе предыдущих ПЦР как раз и призвана система с использованием урацил ДНК гликозилазы.
Простая и эффективная процедура с использованием урацил ДНК гликозилазой (UNG) основана на способности этого фермента разрушать только специфические продукты ПЦР предыдущего эксперимента и не затрагивать вносимую ДНК и праймеры. Урацил ДНК гликозилаза катализирует удаление урацила из одно- или двухцепочечной ДНК, синтезированной при использовании в смеси трифосфатов dUTP вместо dTTP.
Новообразованная под действием урацил ДНК гликозилазы химическая структура при нагревании в щелочных условия дает разрыв по фосфатной связи, что приводит к разрушению цепи. Но и при повышенной температуре (+ 95 °С) в стандартном ПЦР буфере можно добиться разрушения цепи, лишенной основания урацил.
Основание рибоурацил, входящее в состав РНК, и dUTP само по себе не являются субстратами для урацил ДНК гликозилазы.
Принцип метода деконтаминации ПЦР вкратце можно представить следующими стадиями:     
  • Замещение dTTP на dUTP в ходе ПЦР
    •     
  • Обработка смеси урацил ДНК гликозилазой перед постановкой ПЦР
    •     
  • Разрушение нестабильной новообразованной структуры при повышенной температуре (+ 95 °С) в процессе начального этапа денатурации

    • ПЦР продукты с dU вместо dT практически ничем не отличаются по своим свойствам от незамещенного продукта и также могут использоваться для стандартных молекулярно-биологических манипуляций (гибридизация, клонирование, сиквенирование, рестрикционное картирование).
    Хранение - 20 oC
    Транспортировка охлаждение: + 4 oC
    Протоколы
    Возможно приобрести дополнительно

    ©2004 ЗАО "Силекс".    Все права защищены.
    Контакты:    ЗАО "Силекс"    -   Заказы и вопросы: info@sileks.com,  тел./факс (495) 737 42 24, тел. (495) 998 42 88